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本产品是E.coli.DNA polymerase I的大片段。对于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保证了其合成DNA时的准确性。

• 双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的补平(fill-in)；
  
• 双链DNA 3'突出(3'overhang)的打平(也称削平)；
  
• 5'突出末端的标记；
  
• 随机引物法进行DNA标记；
  
• Sanger双脱氧法进行DNA测序；
  
• cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成。

37℃ 30分钟时间内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：
67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl₂，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/mL poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。



来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。


75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment有抑制作用。

组分	规格
Klenow Fragment(2U/μL)	50μL
10×Reaction Buffer	300μL
说明书	1份

保存：-20℃


10×Reaction Buffer：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl₂，10mM DTT。


25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。

• 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的补平：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    Digested DNA	10～15μL(0.1～4μg)
    10×Reaction Buffer	2μL
    dNTP Mixture(2.5mM each)	0.4μL
    Klenow Fragment	0.5～2μL(1～4U)
    无核酸酶的去离子水	至20μL

    
    
  • 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 37℃孵育10分钟。
    
  • 75℃孵育10分钟终止反应。
• 双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的标记：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    Digested DNA	10～15μL(0.1～4μg)
    10×Reaction Buffer	2μL
    [α-32P]-dNTP,~15～30 TBq/mmol(400～800Ci/mmol)	0.74 MBq(20μCi)
    或[α-32P]-dNTP,~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)	2.96 MBq(80μCi)
    dNTP Mixture(2.5mM each,without the labeled dNTP)	2μL
    Klenow Fragment	0.5μL(1U)
    无核酸酶的去离子水	至20μL

    
    
  • 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 30℃孵育15分钟。
    
  • 75℃孵育10分钟终止反应。
• 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

相关搜索：Klenow片段，Klenow Fragment